引用:
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作者changold2
小弟當年做的是石蠟包埋BLOCK，或許反應時間不太一樣，但是石蠟切片的background滿高的，跟冷凍切片完全不同，小弟至今還有印象試劑滿毒的
只是臨床診斷用polyclone ANTIBODY以現在的情況已經很少見了，畢竟有一大堆商品化的monoclone AB ，您是做國科會論文嗎，不然應該不會有這麼大的成本壓力
其實只要WESTERN BLOT強度夠，可以去跟別人要融合瘤來養比較便宜
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沒錯 ! 應該是國科會之類的計畫 - 多/快/好/省就是 [操] 了一點 . 研究部門和臨床部門的經費來源不一樣 , 所以當然要省一點來用 . 每次看到別人把稀釋五倍的 FITC-AB , Erosine-AB 用力點下去 , 唉 ! 口水流完了還是得回去老老實實用二十倍稀釋液 .
說得沒錯 ABC-stain 最後一步是利用 horsereddish peroxidase (馬齒莧過氧化脢) 在稀釋的 H2O2 中氧化 DAB (4,4'-diaminobenzidine, 4,4'-二胺基聯苯). DAB 會引起膀胱癌 . 所以都是在星期六中午以後 , 人跑的差不多的時候開通風櫥大量製備 10X 濃縮液 , 分裝進入 epondoff , 然後用石蠟膜封住放入攝氏 -40 冰箱結冰保存 . 所以只要操一個下午就可以撐上兩三個月 . 每次用的時候都是很新鮮的 substrate , 不然辛苦做出的 slide 鐵定因為背景太髒而被退回 . 當然 DAB 最便宜所以被廣泛採用 , 還有其他的芳香族二胺也可以拿來當 substrate , 但是成本價錢就沒那麼漂亮 .
hybridoma , affinity column , crosslink kit ... 當年沒有商業化的 kit 可用 , 這些都是研究生自己要讀 paper 慢慢下功夫做出來的 . 養 hybridoma 的 BSA 也不便宜啊 , 還有養不好會掛的風險 ! 最好能多找幾個實驗室來量產 , 可是會用這等神兵利器的都是潛在的競爭對手 , 要老闆們真心合作談何容易 !